Цитогенетическое действие протонного терапевтического пучка с энергией 170 МЭВ на клетки человека тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.01, кандидат биологических наук Зайцева, Екатерина Михайловна

• Зайцева, Екатерина Михайловна
• кандидат биологических наук
• 0

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Зайцева, Екатерина Михайловна

Оглавление

Введение

Глава 1. Литературный обзор

Глава 2. Материалы и методы исследования

2.1. Протонный пучок

2.2. Облучение лимфоцитов крови человека

2.3. Культивирование лимфоцитов

2.4. Приготовление препаратов клеток для цитогенетического анализа

2.5. Анализ хромосомных аберраций

2.6. Статистическая обработка данных

Глава 3. Результаты исследования

3.1. Исследование роли физического фактора при облучении клеток человека протонами терапевтического пучка

3.2. Влияние биологического фактора при облучении делящихся клеток человека протонами терапевтического пучка

3.2.1. Исследование радиочувствительности лимфоцитов в разных фазах клеточного цикла

3.2.2. Образование хромосомных нарушений в лимфоцитах крови человека, облученных в разных фазах клеточного цикла протонами в области пика Брэгга

3.2.3. Оценка эффективности протонов терапевтического пучка в области пика Брэгга при облучении асинхронной популяции клеток

человека

Глава 4. Обсуждение результатов

Выводы

Заключение

Список литературы

Приложения

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Цитогенетическое действие протонного терапевтического пучка с энергией 170 МЭВ на клетки человека»

Введение

Актуальность исследования. Лучевая терапия является одним из основных методов лечения в онкологии. По данным БОНД РАМН она рекомендуется в 50-70 % случаев заболевания как самостоятельно, так и в комбинации с другими видами лечения (хирургия, химиотерапия). Важнейшей задачей при ее проведении является минимизация повреждений здоровых тканей с максимальным поражением тканей опухоли. В связи с этим, все более широкое распространение в онкологической практике приобретает протонная лучевая терапия. Она является одним из наиболее перспективных и быстро развивающихся направлений в современной ядерной медицине.

По сравнению с обычно используемыми электромагнитными видами излучений протоны обладают рядом преимуществ. При прохождении через биологические ткани они формируют треки, в пределах которых расходуют энергию на ионизацию и возбуждение атомов и молекул. Процесс сопровождается замедлением движения и уменьшением остаточной энергии частиц, что обусловливает возрастание плотности ионизации с максимумом на конечном участке пробега в области пика Брэгга. Такая особенность их энерговыделения с реализацией «Брэгговского максимума» в конце пробега создает условия для оптимального формирования дозы в тканях опухолей с максимальным повреждением их клеток при облучении в области пика Брэгга и минимальным повреждением окружающих тканей и тканей по ходу пучка частиц до места локализации опухоли. Такой терапевтический протонный пучок впервые в России был создан в Объединенном институте ядерных исследований на синхроциклотроне Лаборатории ядерных проблем в 1967 году (Джелепов В. П. и др., 1975) и в течение длительного периода используется для проведения лучевой терапии пациентов.

Поскольку ведущая роль в развитии лучевых повреждений клеток млекопитающих и человека и в их постлучевой гибели принадлежит структурным нарушениям хромосом, изучение закономерностей образования

3

хромосомных аберраций при проведении протонной лучевой терапии имеет несомненное значение и представляется важной задачей. Весьма актуальной является проблема нормирования лучевых нагрузок на пациентов при проведении протонной лучевой терапии. Остаются недостаточно изученными вопросы о соотношении выхода структурных аберраций хромосом в неделящихся клетках нормальных тканей по ходу пучка частиц и в делящихся клетках опухолей. Эти обстоятельства определили проведение настоящего исследования.

В качестве модели для исследования повреждений хромосомного аппарата клеток человека использована культура лимфоцитов периферической крови человека. Тест-система для цитогенетического анализа хромосом человека рекомендована Всемирной организацией здравоохранения (ВОЗ) для исследования влияния неблагоприятных факторов окружающей среды на клетки человека и на наследственность. Как известно, в периферической крови человека лимфоциты не делятся и находятся в состоянии покоя или пресинтеза ДНК. Однако под действием фитогемагглютинина (ФГА) Т-лимфоциты в условиях культивирования способны к трансформации с последующим митотическим делением. Важным обстоятельством является также то, что выход аберраций хромосом в лимфоцитах крови человека при воздействии ионизирующих излучений практически совпадает in vitro и in vivo (Brewen J.G. and Gengozian N., 1971; Buckton K.E. et al., 1971; Schmid E. et al., 1974). Использование культуры лимфоцитов в таких исследованиях позволяет избежать вынужденных экстраполяций и оговорок, неизбежно возникающих при интерпретации результатов, полученных на других объектах.

Цель и задачи исследования. Целью работы является сравнительное цитогенетическое исследование действия протонов терапевтического пучка фазотрона с исходной энергией 170 МэВ на неделящиеся клетки человека и протонов в области пика Брэгга на клетки в разных фазах клеточного цикла.

Для её выполнения поставлены следующие задачи:

1. Провести сравнительный количественный анализ частоты образования клеток с хромосомными аберрациями, общего числа и разных видов аберраций хромосом в лимфоцитах крови человека при действии протонов терапевтического пучка на входе в объект и в области пика Брэгга.

2. Исследовать характер дозовых зависимостей частоты образования клеток с хромосомными аберрациями и общего числа аберраций хромосом в лимфоцитах, облученных в разных фазах клеточного цикла протонами терапевтического пучка на входе в объект и в области пика Брэгга.

3. Исследовать закономерности возникновения разных видов нестабильных аберраций хромосом в лимфоцитах, облученных в разных фазах клеточного цикла протонами терапевтического пучка на входе в объект и в области пика Брэгга.

4. Провести оценку величины ОБЭ протонов терапевтического пучка с исходной энергией 170 МэВ и в области пика Брэгга по частоте возникновения клеток с хромосомными аберрациями и общему числу аберраций при облучении лимфоцитов в О0-фазе клеточного цикла.

5. Оценить биологическую эффективность протонов в области пика Брэгга при облучении делящихся лимфоцитов по сравнению с воздействием протонов с энергией 170 МэВ на неделящиеся клетки.

Положения и результаты, выносимые на защиту:

1. Цитогенетическими методами выявлены количественные и качественные особенности образования разных видов структурных нарушений хромосом в лимфоцитах периферической крови человека, облученных в разных фазах клеточного цикла протонами терапевтического пучка с исходной энергией 170 МэВ и в области пика Брэгга.

2. Исследована роль физического фактора при воздействии протонов исходного пучка с энергией 170 МэВ и в области пика Брэгга, которая определяется различиями их линейной передачи энергии. Оценка по цитогенетическим показателям относительной биологической

5

эффективности протонов терапевтического пучка при облучении неделящихся клеток (в Go-фазе клеточного цикла) показала, что коэффициент ОБЭ протонов исходного пучка равен 1,0±0,03, а протонов в области пика Брэгга - 1,2±0,1.

3. Выявлена роль биологического фактора в эффективности протонного терапевтического пучка, которая определяется различием в радиочувствительности неделящихся и делящихся клеток. Показана наиболее высокая эффективность протонов в области пика Брэгга при облучении лимфоцитов в вг-фазе клеточного цикла.

4. С учетом вклада в эффект фракции высоко радиочувствительных G2-облученных лимфоцитов коэффициент эффективности протонов терапевтического пучка в области пика Брэгга по сравнению с воздействием протонов-170 МэВ на неделящиеся клетки составил 1,45±0,10.

Научная новизна. В работе впервые:

- Исследована роль физического и биологического факторов в биологической эффективности протонов терапевтического пучка с энергией 170 МэВ.

- Выявлена наиболее высокая радиочувствительность лимфоцитов в G2-фазе клеточного цикла при облучении протонами в области пика Брэгга.

- Проведена оценка биологической эффективности протонов в области пика Брэгга при облучении делящихся клеток по сравнению с действием протонов с исходной энергий 170 МэВ на неделящиеся клетки. По аналогии с ОБЭ рассчитан коэффициент эффективности протонов в области пика Брэгга с учетом вклада в эффекты фракции наиболее радиочувствительных G2-облученных лимфоцитов.

Научно-практическая значимость работы. Результаты исследования имеют как фундаментальное, так и прикладное значение. Они пополняют сведения о радиочувствительности клеток человека в разных фазах клеточного цикла при воздействии корпускулярными видами излучений с разной линейной передачей энергии. Выявленные количественные и

б

качественные характеристики действия протонов терапевтического пучка на клетки человека могут использоваться при оценке воздействия корпускулярными ионизирующими излучениями с разными ЛПЭ, в том числе при проведении лучевой терапии. Количественный учет нестабильных хромосомных аберраций может рассматриваться как один из надежных критериев при разработке и применении методов радиотерапии. Результаты исследования способствуют пониманию процессов формирования хромосомных повреждений в клетках опухолевых и здоровых тканей при проведении лучевой терапии протонами высоких энергий. Полученные данные могут быть полезными при планировании курсов лучевой терапии, при расчетах оптимальных доз лучевого воздействия.

Заключение диссертации по теме «Радиобиология», Зайцева, Екатерина Михайловна

Выводы

1. Выявлены количественные и качественные особенности реакции лимфоцитов периферической крови человека на действие протонов терапевтического пучка фазотрона с исходной энергией 170 МэВ и в области пика Брэгга по цитогенетическим показателям.

2. Показана роль физического фактора в реакции клеток человека на действие протонов терапевтического пучка при облучении неделящихся лимфоцитов (в Оо-фазе клеточного цикла). При оценке по цитогенетическим показателям величина ОБЭ протонов исходного пучка с энергией 170 МэВ близка к 1,0±0,03, протонов в области пика Брэгга -составила ~ 1,2±0,1.

3. По цитогенетическим тестам показано повышение радиочувствительности делящихся лимфоцитов при облучении протонами терапевтического пучка в области пика Брэгга при прохождении ими фаз клеточного цикла.

4. Выявлена наибольшая радиочувствительность лимфоцитов, облученных в 02-фазе клеточного цикла протонами в области пика Брэгга по различным показателям: наиболее продолжительная задержка деления (до 10 ч), высокая частота образования клеток с хромосомными нарушениями и общего числа аберраций хромосом, резкое увеличение фрагментоза хромосом (до 85% от общего числа аберраций), высокая частота образования клеток со множественными (>3) хромосомными аберрациями.

5. Установлены выраженные изменения в соотношениях хромосомных аберраций разных типов при облучении лимфоцитов в во- и С2-фазах клеточного цикла протонами терапевтического пучка в области пика Брэгга: высокий уровень аберраций хромосомного типа (-75%) с преобладанием обменных аберраций сменяется преимущественным выходом аберраций хроматидного типа (-70%) с преобладанием фрагментов.

6. Выявлено влияние биологического фактора в реакции клеток человека на облучение протонами терапевтического пучка в области пика Брэгга вследствие более высокой радиочувствительности делящихся клеток. По сравнению с воздействием протонов-170 МэВ на неделящиеся клетки коэффициент биологической эффективности протонов терапевтического пучка в области пика Брэгга с учетом вклада в эффект фракции радиочувствительных С2-облученных лимфоцитов человека составил ~1,45±0Д0.

Заключение

Диссертационная работа выполнена в Лаборатории радиационной биологии Объединенного института ядерных исследований. Она является результатом цитогенетического исследования лимфоцитов крови человека, облученных протонами терапевтического пучка фазотрона ОИЯИ и у-лучами (на аппарате для дистанционной лучевой терапии РОКУС-М) в Медико-техническом комплексе Лаборатории ядерных проблем им. В.П. Джелепова.

В работе представлены результаты исследования хромосомных нарушений в лимфоцитах крови человека стандартным метафазным методом после облучения образцов цельной крови (клетки в Огфазе клеточного цикла) и культуры лимфоцитов в разных фазах клеточного цикла протонами терапевтического пучка с исходной энергаей 170 МэВ, подготовленном для проведения лучевой терапии пациентов. Лимфоциты использованы в качестве модели дня оценки эффектов при облучении в двух точках глубинного дозного распределения: на входе в биообъект исходного пучка частиц (ЛПЭ ~ 0,5 кэВ/мкм) и в области пика Брэгга (ЛПЭ простирается вплоть до 100 кэВ/мкм). Такой подход в определенной степени моделирует облучение, соответственно, клеток нормальных тканей по ходу пучка протонов до места локализации опухоли и непосредственно клеток опухоли. Анализ реакции лимфоцитов при этом позволяет оценить роль как физического, так и биологического факторов в эффективности протонов терапевтического пучка.

Проведен сравнительный количественный и качественный анализ полученных данных по индукции клеток с хромосомными нарушениями, общему числу возникающих аберраций хромосом и частоте образования разных видов нестабильных хромосомных аберраций в лимфоцитах крови человека. Показана более высокая эффективность протонов в области пика Брэгга. При облучении лимфоцитов в во-фазе клеточного цикла величина их ОБЭ составила ~ 1,2±0,1. Для моделирования действия протонов на клетки опухолей, для которых в отличие от здоровых тканей характерны процессы деления, были исследованы эффекты при облучении лимфоцитов в разных фазах клеточного цикла. Показана высокая радиочувствительность лимфоцитов, облученных в 02-фазе клеточного цикла протонами терапевтического пучка в области пика Брэгга. Проведена оценка вклада в суммарный эффект от С2-облученных лимфоцитов. Расчетами показано повышение биологической эффективности протонов в области пика Брэгга до ~ 1,45±0,08 по сравнению с облучением лимфоцитов в О0-стадии клеточного цикла исходным пучком протонов-170 МэВ.

Результаты проведенного исследования могут способствовать пониманию процессов формирования хромосомных повреждений в клетках опухолевых и нормальных тканей, которые приводят к гибели клеток, при проведении лучевой терапии протонами высоких энергий. Вместе с тем появляется возможность уменьшения дозовой нагрузки на здоровые ткани без снижения качества лечения.

Диссертационная работа изложена на 128 страницах, состоит из введения, 4-х глав, выводов и заключения, содержит 10 таблиц и 26 рисунков. Список литературы включает 79 названия, из которых 33 на русском и 46 на английском языках.

Выражаю глубокую признательность директору Лаборатории радиационной биологии ОИЯИ доктору биологических наук, профессору Красавину Е. А. за постоянное внимание к работе. Выражаю глубокую благодарность научному руководителю диссертационной работы кандидату биологических наук Говорун Р. Д., своей помощью и личным участием обеспечившей ее выполнение. Выражаю большую благодарность начальнику отдела НХП отдел фазотрона ЛЯП ОИЯИ к.т.н. Мицыну Г. В. и старшему научному сотруднику к.т.н. Молоканову А. Г., осуществлявшим дозиметрию и облучение биологических образцов протонным терапевтическим пучком фазотрона.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Зайцева, Екатерина Михайловна, 0 год

Список литературы

1. Агапов А. В., Гаевский В. Н., Гулидов И. А., Иглин А. В., Лучин Е. И., Мицын Г. В., Молоканов А. Г., Цейтлина М. А., Череватенко Е. П., Швидкий С. П. Методика трехмерной конформной протонной лучевой терапии // Письма в ЭЧАЯ, 2005, т. 2, № 6 (129), с. 80-86.

2. Бочков В.П. Хромосомы человека и облучение. М.: Атомиздат. 1971. 167с.

3. Витанова А., Влчек Б., Гаевский В.Н., Молоканов А.Г., Спурны Ф., Фадеева Т.А., Шмакова Н.Л. Исследование относительной биологической эффективности клинического протонного пучка фазотрона ЛЯП ОИЯИ // Сообщение ОИЯИ. Р16-2002-71. Дубна. 2002. 7 с.

4. Ворожцова С. В. Радиобиологические эффекты в клетках эпителия роговицы при воздействии протонов и тяжелых ионов: Автореф. дис.

канд. наук. М., 1973. 18 с.

5. Герасименко В.Н., Говорун Р.Д., Рыжов Н.И. Действие ускоренных ионов бора, углерода и неона на хромосомы лимфоцитов человека in vitro // Радиобиология. 1980. Т. 20. В. 2. С. 206-211.

6. Говорун Р. Д. Нарушение процессов клеточного деления в костном мозгу крыс, облученных протонами 50 МэВ // Космич. Биол. и мед. 1968. №6. С. 21-25.

7. Говорун Р. Д., Рыжов Н.И., Тоцева A.M., Малютина Т.С., Герасименко В.Н. Исследование хромосомных аберраций в лимфоцитах периферической крови человека при воздействии in vitro протонами с энергией 645 МэВ и рентгеновскими лучами // Космич. биол. и мед. 1973. Т. 7. № 2. С. 79-83.

8. Говорун Р.Д., Ворожцова C.B., Герасименко В.Н. Исследование цитогенетических эффектов при воздействии высокоэнергитичных заряженных частиц // Космич. биология и авиокосмич. медицина. 1982. Т. 16. С. 64-66.

9. Говорун Р. Д., Рыжов Н. И., Смирнова О. А., Портман А. И., Эрцгребер Г., Айхорн К. Действие тяжелых ионов на клетки млекопитающих.

93

Сообщение 1. Цитогенетические эффекты при облучении клеток китайского хомячка ускоренными ионами гелия, углерода и неона // Радиобиология. 1982. Т. 22. В. 5. С. 648-653.

Ю.Гольдман И.Л. и Левина Л.Я. Анализ хромосом человека в лейкоцитах периферической крови // Бюлл. экспер. биол. и мед. 1964. Т. 58. № 11. С. 103-107.

11. Григорьев Ю. Г. Биологическое действие протонов высоких энергий. М.: Атомиздат. 1967. 505 с.

12.Григорьев Ю. Г. Радиационная безопасность космических полетов. М.:

Атомиздат. 1975. 253 с.

13. Грызинский М. А., Гольник Н., Зельчинский М., Молоканов А. Г., Швидкий С. В. Определение коэффициента качества излучения в протонносм пучке с помощью рекомбинационной камеры // Сообщение ОИЯИ. Р16-2010-38. Дубна. 2010. 17 с.

М.Джелепов В. П., Гольдин Л. Л., Рудерман А. И., Ярмоненко С. П., Вайнберг М. С., Савченко О. В., Хорошков В. С. Протонные пучки высоких энергий и лучевая терапия злокачественных опухолей. - Дубна. 1975.С. 96-108.

15.Джемилев 3. А. Радиочувствительность хромосом лейкоцитов периферической крови человека в разных фазах митотического цикла // Генетика. 1967. т. 3. №5. С. 67-78.

16.Дубинина Л. Г. Лейкоциты крови человека - тест-система для оценки мутагенов среды. М.: Наука. 1977. 152 с.

17.Красавин Е.А., Говорун Р.Д., Шмакова Н.Л., Кошлань И.В., Насонова Е.А., Репин М.В. Генетическое действие излучений с разными физическими характеристиками на клетки млекопитающих и человека // ЭЧАЯ. 2004. Т. 35. В. 6. С. 1483-1511.

18.Митрофанов Ю. А. Радиочувствительность клеток в различных фазах митотического цикла. - В кн.: Успехи современной генетики. М.: Наука, 1969, вып. 2, с.125-160

19.Молоканов А.Г. Формирование радиотерапевтического протонного пучка фазотрона ЛЯП ОИЯИ // Вопросы атомной науки и техники. 2008. №5 (50). С. 146-149.

20.0батуров Г.М. Хромосомные аберрации и репродуктивная гибель клеток млекопитающих. Количественные соотношения между этими эффектами // Радиобиология. 1986. Т. 26. В. 4. С. 465-472.

21.Пяткин Е. К., Нугис В.Ю., Покровская В.Н. Пролиферативная активность и частота аберраций хромосом в первом митозе в 50-, 60- и 70-часовых культурах облученных лимфоцитов и смешанных культурах облученных и необлученных клеток // Радиобиология. 1984. Т. 24. В. 3. С. 310-314.

22.Репин М. В., Говорун Р. Д., Красавин Е. А. Хромосомные нарушения в лимфоцитах человека при действии ускоренных заряженных частиц // ЭЧАЯ. 2002. Т. 33. В. 3. С. 747-766.

23.Рыжов Н. И., Тоцева А. М., Говорун Р. Д., Малютина Т. С., Герасименко В. Н. Исследование хромосомных аберраций в лимфоцитах при воздействии in vitro протонами с энергией 645 МэВ и рентгеновскими лучами // Космическая биология и медицина. 1973. №2. С. 79-83.

24.Севанькаев A.B., Бочков Н.П. Влияние гамма облучения на хромосомы человека. Сообщение 1. Зависимость частоты хромосомных аберраций от дозы при облучении in vitro // Генетика. 1968.Т.4. В.5. С. 130-137.

25.Севанькаев А. В., Лучник Н. В. Влияние гамма-облучения на хромосомы человека. VII. Связь между образованием аберраций хроматидного типа и клеточным циклом // Генетика. 1973. Т. 9. №11. С. 165-171.

26.Севанькаев A.B., Козлов В.М. Митотическая активность лимфоцитов человека при облучении в различных стадиях клеточного цикла // Радиобиология. 1974. Т. 14. №1. С. 117-119.

27.Севанькаев А. В., Насонова В. А., Лучник Н. В. Реакция хромосом лимфоцитов человека на однократное и фракционированное у-облучение в различных стадиях митотического цикла // Радиобиология. 1980. Т.20. №3. С. 361-367.

28.Севанькаев А. В. Радиочувствительность хромосом лимфоцитов крови человека в митотическом цикле. М.: Энергоатомиздат. 1987.159 с.

29. Серебряный А. М., Алещенко А. В., Антощина М. М., Кудряшова О. В., Рябченко Н. И., Семенова JI. П., Пелевина И.И. Изменение радиочувствительности лимфоцитов крови человека в разных митотических циклах после облучения в малых дозах // Радиационная биология. Радиоэкология. 2008. Т. 48. №6, С. 713-720.

30. Су сков И. И. Хромосомные аберрации в культуре лейкоцитов человека. Радиочувствительность хромосом и доза-эффект // Генетика. 1967. Т. 7. С. 112-118.

31.Сынзыныс Б. И., Аминев А. Г., Саенко А. С., Пелевина И. И. Подавление инициации синтеза ДНК как показатель радиочувствительности клеток // Радиобиология. 1987. Т. 17. В. 2. С. 224-226.

32.Тоцева A.M., Рыжов Н.И., Герасименко В.Н., Дерменджиев Е. Действие протонов с энергией 25 и 50 МэВ на хромосомы лимфоцитов периферической крови человека ин витро // Космич. биол. и авиакосмич. мед. 1980. Т.14. № 1. С. 54-60.

33. Шмакова Н. JT. Цитологический анализ действия протонов высоких энергий III. Дозовая зависимость и динамика хромосомных аберраций и митотического индекса в костном мозге мышей, облученных протонами 660 МэВ и у-лучами Со60 // Радиобиология. 1965. Т. 5. В. 2. С. 275-278.

34.Bajerska A., Liniecki J. The yield of chromosomal aberrations in rabbit leukocytes after irradiation in vitro and in vivo // Mutat. Res. 1975. V. 27. P. 271-281.

35.Bender M.A., Prescott D.M. DNA synthesis and mitosis in cultures of human peripheral leucocytes // Exptl. Cell. Res. 1962. V. 27, №1, P. 221-229.

36.Bender M.A., Awa A.A., Brooks A.L., Evans H.J., Groer P.G., Littlefield L.G., Pereira C., Preston R. J., Wachholz B.W. Current status of cytogenetic procedures to detect and quantify previous exposures to radiation // Mutat. Rez. 1988. V. 196. P. 103-159.

37.Bick Y. A. E., Brown J. K. Variations in radiosensitivity during the cell cycle in a marsupial cell line // Mutat. Res. 1969. V.8, №3. P. 613-622.

38.Brewen J.G., Gengozian N. Radiation-induced human chromosome aberrations. II. Human in vitro irradiation compared to in vitro and in vivo irradiation of marmoset leukocytes // Mutat. Res. 1971. V. 13. P. 383-391.

39. Bryant P. E. and Mozdarani H. A comparison of G2 phase radiation-induced chromatid break kinetics using calyculin-PCC with those obtained using colcemid block// Mutagenesis Sep. V. 5. № 22. P. 359-62. Epub 2007 Jul 14.

40.Buckton K.E., Langlands A.G., Smith P.G., Woodcock G.E., Looby P.C. Further studies on chromosome aberrations: Production after whole body irradiation in man // Int. J. Radiat. Biol. 1971. V. 19. P. 369-378.

41.Buckton K.E., Hamilton G.E., Paton L., Langlands A. G. Chromosome aberrations in irradiated ankylosing spondylitis patients // In: Mutagen-Induced Chromosome Damage in Man. Eds. by H. Evans and D. Lloyd. Edinburgh University Press. 1978. P. 142-150.

42.Carrano A. V. Induction of chromosomal aberrations in human lymphocytes by X-rays and fission neutrons: dependence on cell cycle stage // Radiat. Res. 1975. V.63.N3.P. 403-421.

43.Collyn-d'Hooghe M., Hemon D., Gilet R., Curtis S.B., Valleron A.J., Malaise E.P. Comparative effects of 60Co - y-rays and neon and helium ions on cycle duration and division probability of EMT-6 cells. A time-lapse cinematography study // Int. J. Radiat. Biol. 1981. V. 39. P. 297-306.

44.Courdi A., Brassart J., Chauvel P. The depth dependent radiation response of human melanoma cells exposed to 65 MeV proton // Br. J. Radiol. 1994. V. 67. P. 800.

45.Deperas J., Szluinska M, Deperas-Kaminska M, Edwards A, Lloyd D, Lindholm C, Romm H, Roy L, Moss R, Morand J, Wojcik A.CABAS: a freely available PC program for fitting calibration curves in chromosome aberration

dosimetry //Radiation Protection Dosimetry, 2007.V. 124, № 2, P. 115-123. (http://www.ujk.edu.pl/ibiol/cabas).

46.Durante M., Furusawa Y., and Gotoh E. A simple method for simultaneous interphase-metaphase chromosome analysis in biodosimetry // Int. J. Radiat. Biol. 1998. №8211; P. 462-473.

47.Edwards A.A., Lloud D.C., Prosser J.S. The induction of chromosome aberrations in human lymphocytes by accelerated charged particles // Radiat. Prot. Dosimetry. 1985. V. 13. P. 205-209.

48.Fussel K., Ritter S., Kraft G. Comparison of RBE for inactivation and chromosomal damage of high energy Carbon ions // Proc. of 6th Workshop on Heavy-Charged Particles in Biology and Medicine. Baveno. GSI. Report 97-09.

1997. V. C3.P. 1.

49.Paganetti H. Calculation of the spatial variation of relative biological effectiveness in a therapeutic proton field for eye treatment // Phys. Med. Biol.

1998. V.43. P. 2147-2157.

50.Paganetti H. Nuclear interactions in proton therapy: dose and relative biological effect distributions originating from primary and secondary particles // Phys. Med. Biol. 2002. № 47. P. 747.

51.Geard C.R. Initial changes in all cycle progression of Chinese hamster V-79 cells induced by high-LET charged particles // Radiat. Res. 1980. V. 83. P. 696709.

52.Hungerford D.A. Leukocytes cultured from small inocula of whole blood and the preparation of metaphase chromosomes by treatment with hypotonic KC1 // Stain Technol. 1965. V. 40. P. 333-338.

53.IAEA (International Atomic Energy Agency, Vienna). 2001. Cytogenetic

analysis for radiation dose assessment // Technical Report Series № 405. 54.Joshi G.P., Nelson W.J., Revell S.H., Shaw C.A. Division probability and division delay in diploid syrian hamster cell following a range of X-ray doses // Int. J. Radiat. Biol. 1982. V. 41. P. 443-448.

55.Lea D.E. Actions of Radiations on Living Cells // University Press. Cambridge. 1946.

56.Lloyd D.C., Purrott R.J., Dolphin G.W., Bolton D., Edwards A.A., Corp M.J. The relationship between chromosome aberrations and low-LET radiation dose to lymphocytes // Int. J. Radiat. Biol. 1975. V. 28. P. 75-90.

57.Lloyd D.C., Purrott R.J., Dolphin G.W., Edwards A.A. Chromosome aberrations induced in human lymphocytes by neutron irradiation // Int. J. Radiat. Biol. 1976. V. 29. P. 169-182.

58.Lloyd D. C., Dolphin G. W., Purrott R. J., Tipper P. A. The effect of X-ray induced mitotic delay on chromosome aberration yields in human lymphocytes // Mutation Research. 1977. V. 42. P. 401-411.

59.Lucas J.N., Hill F.S., Burk C.E., Cox A.B., Straume T. Stability of the translocation Frequency following whole-body irradiation measured in rhesus monkeys // Int. J. Radiat. Biol. 1996. V. 70. P. 309-318.

60.Lucke-Huhle C. alpha-irradiation-induced G2-delay: a period of cells recovery // Radiat. Res. 1982. V. 89. P. 298-308.

61.Lucke-Huhle C., Hieber L., Wegner R.-D. Caffeine-mediated release of alpha-radiation-induced G2 arrest increases the yield of chromosome aberration // Int. J. Radiat. Biol. 1983. V. 43. P. 123-132.

62.Moorhead P.S., Nowell P.C., Mellmann W.J., Battips D.M., Hungerford D.A. Chromosome preparations of leukocytes cultured from peripheral blood // Exptl. Cell Res. 1960. V. 20. P. 613-616.

63.Morand J., Deperas-Standylo J, Urbanik W, Moss R, Hachem S, Sauerwein W, Wojcik A. Confidence intervals for Neyman-type A distributed events // Radiat Prot Dosimetry. 2008; V. 4. №128. P.437-43.(http://www.ujk.edu.pl/ibiol/neta).

64. Nasonova E., Ritter S. Cytogenetic effects of densely ionising radiation in human lymphocytes: impact of cell cycle delays // Cytogenet Genome Res. 2004. № 104(1-4). P. 216-20.

65.Norman A., Sasaki M.S., Ottomana R.E., Fingerhut A.G. Elimination of chromosome aberrations from human lymphocytes // Blood. 1966. V. 27. P. 706-714.

66.Paganetti H. Nuclear interactions in proton therapy: dose and relative biological effect distributions originating from primary and secondary particles // Phys. Med. Biol. 2002. V.47. P. 747-764.

67. Perry P., Wolf S. New Giemsa method for differential staining of sister chromatids // Nature. 1974. V. 251. P. 156-157.

68.Ritter S., Nasonova E., Kraft-Weyrather W., Kraft G. Influens of radiation quality on the expression of chromosomal damaged // Int. J. Radiat. Biol. 1994. V. 66. P. 625-628.

69.Ritter S., Nasonova E., Kraft-Weyrather W., Kraft G. Comparison of chromosomal damage induced by X-rays and Ar ions with an LET of 1840 keV/m|i in Grphase V 79 cells // Int. J. Radiat. Biol. 1996. V. 69. P. 155-166.

70. Savage R. J. Classification and relationships of induced chromosomal structual changes // J Med Genet. 1976 Apr,V. 2. №13. P.103-22.

71.Schmid E., Bauchinger M., Bunde E., Ferbert H.F., Lieven H.V. Comparison of the chromosome damage and its dose response after medikai whole-body exposures to 60Co y-rays and irradiation of blood in vitro // Int. J. Radiat. Biol. 1974. V. 26. P. 31-37. 72.Sinclair W. K., Morton R. A. X-Ray sensitivity during the cell generation cycle of cultured Chinese hamster cells // Radiat. Res. 1966 Nov. V. 29. №3. P. 45074.

73. Yu C. K., Sinclair W. K. Division delay and chromosomal aberrations induced by x-rays in synchronized Chinese hamster cells in vitro II Natl. Cancer Inst.

1967. № 39. P 619-632.

74. Sinclair W. K. Cyclic X-ray responses in mammalian cells in vitro II Radiat. Res. 1968. №33. P. 620-643.

75.Skarsgard L. D., Kihlman B. A., Parker L., Pujara C. M., Richardson S. Survival, chromosome abnormalities and recovery in heavy-ion-and X-

irradiated mammalian cells // Radiation research supplement, 1967. №7. P. 208221.

76.Tang J. V., Inoue T., Inoue T., Yamazaki H., Fukushima S., Fournier-Bidoz N., Koizumi M., Ozeki S., Hatanaka K. Comparison of Radiobiological Effective Depths in 65-MeV Modulated Proton Beam // Br. J. Cancer. 1997. V. 76. P. 220-225.

77.Tolkendorf E., Eichhorn K. Effect of ionizing radiation of different linear energy transfer on the on the induction of cellular death and of chromosome aberrations in cells of the Chinese hamster // Studia biophysica. 1983. V. 95. № l.P. 43-50.

78.Yang T. C. Proton radiobiology and uncertainties // Radiat. Meas. 1999. № 30. P. 383-392.

79.Yu C. K., Sinclair W. K. Mitotic delay and chromosomal aberrations indused by X-rays in synchronized Chinese hamster cells in vitro // J. Nat. Cancer Inst. 1967. V. 39, N4. P. 619-632.