Конструирование магноиммуносорбента для обнаружения возбудителя сибирской язвы тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.23, кандидат биологических наук Лягоскин, Иван Владимирович

• Лягоскин, Иван Владимирович
• кандидат биологических наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Лягоскин, Иван Владимирович

Список сокращений

1. Введение

1.1 Актуальность темы

1.2 Цель и задачи исследований 12 1.3. Научная новизна работы

1.4 Практическая значимость результатов исследования

1.5 Основные положения диссертационной работы, выдвигаемые на защиту

1.6 Апробация и публикация результатов

1.7 Личный вклад автора в выполнении работы

1.8 Объем и структура диссертации

2. Обзор литературы

2.1 Общая характеристика микроорганизма и его таксономическое положение

2.2 Экология возбудителя сибирской язвы

2.3 Антигенный состав Bacillus anthracis

2.3.1 Капсула

2.3.2 Клеточная стенка

2.3.3 Споры

2.3.4 Внеклеточные антигены В.anthracis

2.4 Получение бактериальных антигенов 32 2.4.1 Физические методы

2.4.1.1 Продавливание с помощью пресса

2.4.1.2 Разрушение ультразвуком

2.4.1.3 Баллистическое разрушение

2.4.1.4 Измельчение в твердом состоянии

2.4.1.5 Получение термоантигенов

2.4.2 Химические методы

2.4.2.1 Экстракция антигенов клеточной поверхности

2.4.2.2 Применение детергентов

2.4.2.2.1 Ионные детергенты

2.4.2.2.2 Неионные детергенты

2.4.2.2.3 Соли желчных кислот

2.4.3 Физико-химические методы разрушения клеток

2.5 Индикация и идентификация возбудителя сибирской язвы в объектах внешней среды

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Конструирование магноиммуносорбента для обнаружения возбудителя сибирской язвы»

1.1 Актуальность темы

Совершенствование существующих и разработка новых методов индикации различных микроорганизмов в объектах внешней среды продолжают оставаться актуальной проблемой. Уже более 50 лет для индикации патогенных микроорганизмов успешно применяются иммунохимические методы. В их основе лежит образование высокоспецифического комплекса между антигеном и антителом. Причем главная задача при разработке иммунодиагностических тест-систем состоит в визуализации единичных взаимодействий антиген-антитело путем регистрации макроскопического сигнала. На практике значительные потенциальные возможности биотехнологических методов на основе специфичных антител для детекции опасных патогенов не всегда реализуются. Во-первых, это связано с серьёзными трудностями, возникающими при выделении культур микроорганизмов из различных объектов внешней среды, особенно в тех случаях, когда концентрация обнаруживаемых бактерий в пробе является низкой. Вторым фактором, затрудняющим детекцию инфекционных агентов, является высокий уровень контаминации исследуемых объектов посторонней непатогенной микрофлорой, в том числе близкородственной, обладающей значительным уровнем антигенного родства. Например, межвидовые антигенные различия В. anthracis и других непатогенных представителей этого рода (В. cereus, В. subtilis, В. thuringiensis) минимальны.

Для преодоления указанных трудностей индикации патогенов из объектов окружающей среды был предложен метод, основанный на использовании магнитных сорбентов, представляющих собой полимерные микрогранулы с композитными феррочастицами, и иммобилизированными на их поверхности специфическими антителами. Иммуносорбенты позволяют осуществлять селективное концентрирование на своей поверхности целевых клеток из смеси с другими бактериями и дают возможность проведения дальнейшей идентификации патогена [Ефременко В.И., 1996].

Учитывая перспективность метода иммуномагнитной сепарации в последнее десятилетие учеными разрабатываются иммуномагнитные биосорбенты для экспресс индикации различных агентов. Так, Зинченко О.В. с соавт. (2006) разработали эффективный способ подготовки проб почвы, контаминированной Burkholderia pseudomallei, Николаева О.Г., Гаврюшкин

A.Н., и др. (2006) использовали комплекс магносорбентов с моноклональными антителами, для выявления клеток Francisella tularensis.

B.И. Ефременко с соавт. (2008) предложили способ выделения вируса гриппа птиц в пробах воды с применением МИС.

Сибирская язва относится к инфекциям основным источником возбудителя которых в последние десятилетия стала почва. Однако до настоящего времени в арсенале практических врачей отсутствуют методы, позволяющие объективно оценить уровень зараженности мест сибиреязвенных захоронений и степень их эпидемической опасности. Применяемые утвержденные методы обнаружения B.anthracis характеризуются высокой трудоемкостью, низкой чувствительностью и эффективностью выделения - 0,6 - 9,7 % [Бургасов П.Н. и др., 1970; Соркин Ю.И. и др., 1988, Г.Г. Онищенко и др. 2006].

Использование селективных сред упрощает выделение В. anthracis из объектов внешней среды, содержащих близкородственные бациллы, [Kiel J. 1998, Parker J.F., 1999, D.C. Dragon and R.P. Rennie, 2001], но появление в результате длительного нахождения в почве атипичных сибиреязвенных штаммов может сильно затруднять идентификацию патогена.

Для повышения эффективности индикации В. anthracis в пробах почвы за счет селективного концентрирования Абгарян А.Г. с соавт. (2003) было предложено применение магнитных частиц с сорбированными антиспоровыми иммуноглобулинами G, при этом используемые авторами иммуноглобулины имели высокий уровень перекрестных реакций с культурами близкородственных сапрофитов.

По данным ряда авторов, клеточная стенка В. anthracis помимо группоспецифических содержит и видоспецифические антигены [Безносов М.В. 1997; Микшис Н.И. и др, 2004; John W. et al., 1988, R. Fluck et al. 1997, A.P. Phillips et K.L. Martin 1998], получение к которым антител и конструирование на их основе магноиммуносорбентов позволит повысить специфичность и эффективность методов индикации, за счет избирательного выделения целевых микроорганизмов.

Таким образом, проведение работ по совершенствованию методов индикации возбудителя сибирской язвы в объектах внешней среды на основе конструирования магноиммуносорбента с иммобилизированными на его поверхности высокоспецифичными антителами против антигенных детерминант спор В. anthracis является актуальной задачей.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология», Лягоскин, Иван Владимирович

6. ВЫВОДЫ

1. В результате комплексного изучения биологических свойств штаммов/изолятов рабочей коллекции выявлены штаммы сапрофитов с высокой степенью фенотипического и антигенного родства, которые целесообразно использовать при разработке и определении диагностической ценности тест-систем, предназначенных для обнаружения и идентификации сибиреязвенного микроба.

2. Установлено, что схема иммунизации кроликов и коз, заключающаяся в чередующихся внутривенных и подкожных введениях споровых антигенов с интервалом 72 часа позволяет получать высокоактивные и специфичные антиспоровые сыворотки.

3. В результате проведённых исследований установлено различие в количестве общих с сибиреязвенным микробом (В. anthracis 55-ВНИИВВиМ) антигенов спор у штаммов сапрофитов с высоким уровнем антигенного родства {В. cereus Дакар 1) и типичных представителей рода Bacillus {В. cereus №96) — 16 и 9 соответственно.

4. Предложен метод получения видоспецифических противосибиреязвенных антиспоровых иммуноглобулинов, пригодных для конструирования иммунореагентов для иммунофлюоресцентного и иммуноферментного анализов. Использование данных иммуноглобулинов позволяет снизить уровень перекрестных взаимодействий с антигенами близкородственных сапрофитов {B.cereus №96 и Дакар 1).

5. Полученные пероксидазный и ФИТЦ-коньюгаты в рабочих разведениях 1:12800 и 1:16, соответственно, в прямых методах ТФ ИФА и МФА выявляют споры возбудителя сибирской язвы и наиболее близких в антигеном отношении B.cereus изолят №69, штамм Дакар 1 и не взаимодействуют со спорами типичных представителей рода Bacillus {B.cereus №96, B.subtilis 830, B.mesentericus 66, B.pumilis NRS).

6. Разработанный сэндвич - метод ТФ ИФА позволяет специфически дифференцировать споры сибиреязвенного микроба, от спор штаммов сапрофитов рода Bacillus независимо от степени их антигенного родства.

7. Сконструирован магноиммуносорбент на основе иммуноглобулинов к спорам В. anthracis использование, которого позволяет селективно выделять споры возбудителя сибирской язвы из проб объектов внешней среды (почва, вода), снижает нагрузку сопутствующей нормофлоры, в том числе и спорообразующей, что облегчает процесс скрининга подозрительных культур и их последующую идентификацию.

Практические предложения

131

7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Для практического применения предложены:

1 .«Методические рекомендации по подготовке проб почвы к исследованию на контаминацию возбудителем сибирской язвы», утвержденные директором ГНУ ВНИИВВиМ РОССЕЛЬХОЗАКАДЕМИИ (протокол №3 от 26.03.2008 г.).

2. «Методические рекомендации по изготовлению и применению магноиммуносорбента на основе иммуноглобулинов к спорам В.anthracis», утвержденные директором ГНУ ВНИИВВиМ РОССЕЛЬХОЗАКАДЕМИИ (протокол №9 от 11.06.2009 г.).

Вышеперечисленные документы рассмотрены на секции Биотехнологии Отделения ветеринарии РАСХН 29.10.2009.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Лягоскин, Иван Владимирович, 2009 год

1. Александрова, Н.М. Обнаружение спор возбудителя сибирской язвы во внешней среде / Н.М.Александрова, Т.Х.Фаизов // Ветеринарная патология. -2003. № 1. - С.139 - 141.

2. Алиева, Е.В. Магнитоуправляемая тест-система при диагностике листериоза /Е.В.Алиева // Известия высших учебных заведений. СевероКавказский регион. Естественные науки. Приложение. №2(2). — Ростов-н/Д, 2003. - С. 43-45.

3. Алиева, Е.В. Опыт применения новой тест-системы для экспресс-индикации возбудителей кампилобактериоза в условиях чрезвычайной ситуации / Е.В. Алиева // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. 2003. — №6. - С.86-89.

4. Анисенко, О.В. Синтез сорбентов с заданными свойствами и создание на их основе биопрепаратов иммобилизированных ферментов: дис. . канд. биол. наук: 03.00.23 /Анисенко Ольга Владимировна. — Ставрополь, 2005.- 156 с.

5. Архипов, В.В. Об очагах сибирской язвы и их оздоровлении. Вопросы эффективности противосибиреязвенных мероприятий / Архипов В.В.-М., 1974.-С. 153 154.

6. Бакулов, И.А. Сибирская язва (антракс): новые страницы в изучении «старой» болезни / И.А. Бакулов, В.А. Гаврилов, В.В. Селиверстов. Владимир; Вольгинский: Посад, 2001. - 285 с.

7. Барыкова, Ю.А. Выделение и изучение белковых компонентов бактерий рожи свиней вакцинного штамма РВ-2: автореф. дис. . канд. биол. наук: 03.00.23 / Барыкова Юлия Александровна. Щелково, 2005. - 24 с.

8. Безносов, М.В. Выделение и изучение специфических антигенов Bacillus anthracis с целью конструирования диагностических ипрофилактических препаратов: дис канд. биол. наук: 03.00.07 / Безносов

9. Михаил Владимирович. Саратов, 1997. — 177с.

10. Биологическая безопасность / М.А.Пальцев и др.. — М.: Медицина, 2006. 304 е.: ил.

11. Буерова, С.В. Усовершенствование средств диагностики и идентификации возбудителя сибирской язвы дис. канд. биол. наук: 03.00.07; 16.00.03 / Буерова Светлана Васильевна. Казань, 2002. - 168с.

12. Бургасов, П.Н. Метод оценки противосибиреязвенного иммунитета по превентивным свойствам сыворотки / П.Н. Бургасов, Г.И. Рожков // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. 1971. -№ 6 - С. 124-134.

13. Бургасов, П.Н. Сибиреязвенная инфекция / П.Н. Бургасов, Г.И. Рожков. М.: Медицина, 1984. - 212 с.

14. Вершигора, А.Е. Основы иммунологии. Руководство. — 2-е изд., испр. и доп. / А.Е. Вершигора Киев: Вища школа. Головное изд-во, 1980. -504 с.

15. Воллер, А. Иммуноферментные реакции в диагностической медицине. Теория и практика / А. Воллер, А. Бидуэлл // Бюллетень ВОЗ. -1977. -№53. С. 38-45.

16. Выделение белков S-слоя из культуральных фильтратов

17. Выделение из почвы атипичных штаммов сибиреязвенного микроба / Н.П.Буравцева и др. // Профилактика природно-очаговых инфекций: сборник материалов науч. конференции. Ставрополь, 1983. - С. 16-17.

18. Выделение поверхностного антигена вегетативных клеток Bacillus anthracis СТИ-1 и изучение его протективный свойств / М.В. Безносов и др. // Журнал микробиологии эпидемиологии и иммунологии.-1997. -№1.- С. 9-13.

19. Выявление клеток Francis ella tularensis в комплексе с иммуномагнитными частицами / О.Г.Николаева и др. // Материалы VII Межгосударственной научно-практической конференции. Оболенск, 2006.1. C. 226-227.

20. Горшков, С.И. Биологическое действие ультразвука / С.И. Горшков, О.Н. Горбунов, Г.А. Антропов. М.: Медицина, 1965. - 200 с.

21. Гринин, А.С. Очистка, концентрирование и фракционирование вирусов животных / А.С. Гринин, И.Н. Титов. М.: Колос, 1971. - 239 с.

22. Диагностическое значение субъединичного сибиреязвенного антигена/А.К. Галиуллин и др. //Ветеринария. 1996. - №1. - С. 17-19.

23. Дрейд, А.И. Применение ультразвука. 2000 Электронный ресурс. Режим доступа: http: // www.rezonans-npk.ru

24. Дыкман, JI.A. Развитие методологии иммуноанализа почвенныхассоциативных бактерий с использованием препаратов коллоидного золота: автореф. дис.канд. биол. наук: 03.00.23 / Дыкман JI.A. — Саратов, 1996. — 24 с.

25. Егоров, A.M. Теория и практика иммуноферментного анализа / A.M. Егоров, А.П. Осипов, Б.Б. Дзантиев М.: Высшая Школа, 1991. -288 с.

26. Егорова, И.Ю. Фенотипические и генетические маркеры полевых изолятов Bacillus anthracis: дис. канд. вет. наук: 16.00.03 / Егорова Ирина Юрьевна. Покров, 2005.- 115 с.

27. Егорова, И.Ю. Сравнительная эффективность методов индикации Bacillus anthracis в почве / И.Ю. Егорова, Ю.О. Селянинов, И.В. Вологина // Ветеринария. 2006. - №6. - С.26-30.

28. Езепчук, Ю.В. Патогенность как функция биомолекул / Ю.В. Езепчук.-М., 1985.- С. 67-73.

29. Еременко, Е.И. Биологические и популяционные аспекты патогенности Bacillus anthracis: дис. . д-ра. мед. наук: 03.00.07 / Еременко Евгений Иванович. — Ставрополь, 1997.- 275 с.

30. Еременко, Е.И. Прорастание спор возбудителя сибирской язвы / Е.И. Еременко и др. // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2006. - №1. - С. 72 - 74.

31. Ефременко, В.И. Магносорбенты в микробиологических исследованиях / В.И.Ефременко. Ставрополь, 1996. - 131с.

32. Жарникова, И.В. Структурированный керамический носитель с магнитным материалом для иммобилизации антител / И.В. Жарникова // Биотехнология.-2004. -№1.-С.71 -76.

33. Завирюха, А.И. Дифференциальная диагностика возбудителя сибирской язвы от ложносибиреязвенных бацилл / А.И. Завирюха, О.П.Степанюк // Достижения и перспективы борьбы с сибирской язвой в СССР. М., 1978. - С. 130-131.

34. Завирюха, А.И. Почвенные очаги и их санация. Сибирская язва — почвенная инфекция / А.И.Завирюха // Актуальные вопросы профилактики сибирской язвы: тезисы докладов XIII Пленарного заседания

35. Межведомственной научно — методической комиссии по борьбе с сибирской язвой. Ташкент; М, 1990. - С.87.

36. Завирюха, А.И. Сезонные изменения микрофлоры почвы места захоронения трупов животных, павших от сибирской язвы / А.И. Завирюха, О.П. Степанюк // Сборник науч. трудов Украинской с.-х. академии. 1979. -Вып.216. - С.115-118.

37. Здоровье населения и среда обитания // Информационный бюллетень. М, 2004. №11. - С. 49.

38. Злыгостев, А. Бактерии и актиномицеты. Общая характеристика бактерий и актиномицетов Электронный ресурс.- Режим доступа: http: // plant.geoman.ru «Жизнь растений»

39. Иммуногенность рекомбинантных бациллярных штаммов с клонированным геном синтеза протективного антигена Bacillus anthracis / Н.И. Микшис и др. // Молекулярная генетика микробиология и вирусология. 2007. - №3. - С. 15-21.

40. Иммунология. Методы исследований / пер. с англ. М. Трукко и др.; под общей ред. И. Лефковитса, Б. Перниса. М.: Мир, 1983. - 349 е., ил.

41. Иммунология: Практикум / Е.У. Пастер и др.. — Киев.: Выща шк., 1989.-304 е.: ил.56.

42. Иммуноферментный анализ / пер. с англ, под ред. Т. Нго, Г. Ленхоффа. М.: Мир, 1988. - 446с.

43. Исаенко, Е.Ю. Применение ультразвука для дезинтеграции микробных клеток Электронный ресурс. — Режим доступа: www .i minamn. org / j ournal .htm

44. Использование магноиммуносорбентов для обнаружения возбудителя мелиоидоза в пробах почвы методом ПЦР / Зинченко О.В. и др. // Материалы VII межгосударственной научно-практической конференции. Оболенск, 2006. - С. 203-204.

45. Колбасов, Д.В. Изучение генетической вариабельности возбудителя сибирской язвы: дис. канд. вет. наук: 16.00.03 / Колбасов Денис Владимирович. Покров, 2005.- 115 с.

46. Колонии, Г.В. Эволюция сибирской язвы. Сообщение II. История распространения болезни и формирование нозоареала / Г.В. Колонии // Журнал микробиологии, эпидемиологии и эпидемиологии 1971. - №1. -С.118-122.

47. Колычев, Н.М. Ветеринарная микробиология и иммунология / Н.М. Колычев, Р.Г. Госманов. -М.: КолосС, 2003. 432 с.

48. Коротич, А.С. Сибирская язва / А.С. Коротич, Л.И. Погребняк. -Киев: Урожай, 1976. 159 с.

49. Лабораторная диагностика сибирской язвы у животных и людей, обнаружение возбудителя в сырье животного происхождения и объектах внешней среды. Методические указания. М.: Агропромиздат,1989. - 32 с.

50. Ладный, В.И. Сибирская язва на территории Российской

51. Федерации / В.И. Ладный, Г.В. Ющенко // Эпидемиология и инфекционные болезни. 2009. - №2. - С. 36 - 40.

52. Лакин, Г.Ф. Биометрия / Г.Ф. Лакин. М: Высшая школа, 1990.352с.

53. Лашкевич, В.А. Использование моноклональных антител в вирусологии / В.А.Лашкевич // Вопросы вирусологии. 1983. - №6. - С.648 -654.

54. Левина, Е.Н. Изучение антигенов В. anthracis и В. cereus с помощью люминесцентно серологического и цитохимических методов исследования / Е.Н. Левина, Л.Н. Кац // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологиии. - 1966. - №4. - С. 98-103.

55. Литвин, В.Ю. Общие закономерности и механизмы существования патогенных микроорганизмов в почвенных и водных экосистемах / В.Ю.Литвин // Экология возбудителей сапронозов. М., 1988. - С.20 - 34.

56. Ломаковская, В.М. О размножении микроба сибирской язвы в почвах разных типов / В.М. Ломаковская // Научные труды Львовского зооветеринарного института. Львов, 1956. - Т.8. - С.44 - 52.

57. Мавзютов, А.Р. Ингибиторы полимеразной цепной реакции / А.Р. Мавзютов и и др. // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2003. - №3. - С. 93 - 98.

58. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология / под общ.ред. Л.Б. Борисова и A.M. Смирновой. М.: Медицина, 1994. - 528 е.: ил

59. Методы общей бактериологии / пер. с англ., под ред. Ф.Герхардта и др.. М.: Мир, 1983. - 536 е., ил.

60. Микшис, Н.И. Корреляция вирулентности Bacillus anthracis с экспрессией признаков, кодируемых хромосомными генами / Н.И.Микшис, С.А.Еремин, М.Ф.Болотникова // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 1999.-№ 4 - С. 25-29.

61. Микшис, Н.И. Прототипы сибиреязвенных вакцин на основе генно-инженерных бациллярных штаммов и синтезируемых ими антигенов автореф. дис. д-ра. мед. наук: 03.00.07: 03.00.15 / Микшис Наталья Ивановна. Саратов, 2009. - 49 с.

62. Миротворский, К.А. Опыт изучения взаимоотношений между возбудителем сибирской язвы и почвенными микроорганизмами / К.А. Миротворский // Советское Здравохранение Туркмении. — 1940. №6.

63. Митин, С.С. Испытание активности цитоплазменного сибиреязвенного антигена на белых мышах, морских свинках и кроликах / С.С. Митин // Достижения и перспективы борьбы с сибирской язвой в СССР: тезисы докл. науч.-метод. комис. -М.,1978. — С.93-94.

64. Моноклональные антитела для изучения роли антигенов белковой природы в серотипировании бактерий Y.pseudotuberculosis / В.А.Федорова и др. // Молекулярная генетика микробиология и вирусология. -2001. №3. -С. 28-35.

65. Носков, Н.И. Почва — важнейший резервант сибирской язвы / Н.И.Носков // Ученые записки Кабардино Балкарского Гос. Университета. - Нальчик. - 1967. - Вып. 34 - С. 105 - 117.

66. Онищенко, Г.Г. Государственный доклад «О санитарно-эпидемиологической обстановке в России в 1999 2003 г.г.»

67. Опыт использования ГИС-технологий для изучения закономерностей пространственно-временного распределения стационарно неблагополучных по сибирской язве пунктов / Б.Л.Черкасский и др. // Эпидемиология и инфекционные болезни. 2005. - №6.- С. 19-23.

68. Определитель бактерий Берджи / под ред. Дж. Хоулта, Н. Крига, П. Снита и др. М., 1997. - Т.2. - 800 с.

69. Пальцев, М.А О биологической безопасности / М.А.Пальцев // Вестник Российской академии наук. 2003. - Т. 73, № 2. - С. 99-109.

70. Перспективы применения генотипирования Bacillus anthracis в эпидемиологическом анализе / О.И.Цыганкова и др. // Эпидемиология и инфекционные болезни. 2006. - №1.- С.24-28.

71. Покишевский, Н.А. Сибирская язва как почвенная эпизоотия / Н.А. Покишевский, А.Д. Головин // Практическая ветеринария. 1931. - №7. -С.20-23.

72. Полипептидные спектры SDS- антигенэкстрактов представителей рода Bacillus /А.К. Галиуллин и др. // Ветеринария. 2004. - №11. - С.24-27.

73. Получение и свойства пригодного к иммобилизации ферромагнитного кремнезема, модифицированного карбонизированным лигнином и карбодиимидом / Т.Н. Орлова и др. // Вестник Московского Университета (Сер.2 Химия). 2008. - Т.49, №3. - С. 213 - 216.

74. Почва — основной резервуар возбудителя сибирской язвы / Н.Г.Ипатенко и др.. // Ветеринария. 1991. - №12. - С.23 - 26.

75. Преснов, И.Н. Выживаемость в почве возбудителя сибирской язвы: автореф. дис. . канд. вет. наук: 16.00.03. / Преснов И.Н. М., 1966. -20 с.

76. Преснов, И.Н. Изменчивость B.anthracis в природных условиях / И.Н.Преснов // Ветеринария. 1966. -№7. - С. 35 - 37.

77. Проблема биотерроризма в современных условиях / А.А.Воробьев и др.. // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии 2002. - №3. - С. 3 - 12.

78. Продукция белков S- слоя штаммами Bacillus anthracis / Н.И.Микшис и др. // Биотехнология. 2004. - №5. - С.22-32.

79. Профилактика сибирской язвы / Н.Г.Ипатенко и др. // Ветеринария. 1992. - № 2. - С. 31-32.

80. Рогожин, В.В. Практикум по биологической химии: Учебно-методическое пособие / В.В.Рогожин. СПб.: Лань, 2006. — 256 с.

81. Родзиковский, А. В. Популяционная динамика сибиреязвенного микроба в некоторых почвах: дис. канд. мед. наук: 03.00.07. / Родзиковский

82. A. В. Иркутск, 1989. - 114 с.

83. Ройт, А. Иммунология / А. Ройт, Дж. Бростофф, Д.Мейл; пер. с англ. М.: Мир, 2000. - 592с.

84. Роль компонентов S-слоя в иммуногенности возбудителя сибирской язвы / Н.И. Микшис и др. // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2006. - №1. - С. 29 - 32.

85. Романов, М.Г. Моноклональные антитела к антигенам

86. B.anthracis: получение и применение: дис. .канд. биол. наук: 03.00.23 / Романов Михаил Геннадьевич. М., 2005. - 98с.

87. Северин, Е.С. История и современное состояние молекулярной диагностики / Е.С.Северин, М.А.Пальцев // Молекулярная медицина. 2006. - №4. -С.13 - 25.

88. Селянинов, Ю.О. Новый способ определения гемолитической активности штаммов В. anthracis / Ю.О. Селянинов, И.Ю. Егорова // Вестник РАСХН. 2004. - №5. - С. 42-45.

89. Селянинов, Ю.О. О диагностических ошибках при индикации и идентификации В. anthracis / Ю.О. Селянинов, И.Ю. Егорова // Ветеринария. -2008. -№Ю. -С.30-33.

90. Селянинов, Ю.О. Сибирская язва: биологические и генетические свойства возбудителя и технология получения ассоциированных вакцин на основе штамма 55-ВНИИВВиМ: дис. . д-ра. биол. наук: 03.00.23 / Селянинов Юрий Олегович. Покров, 2007.- 262 с.

91. Серологическое родство возбудителя сибирской язвы с некоторыми спорообразующими микробами / В.В. Акимович и др. // Специфическая профилактика особо опасных инфекций: сборник науч. трудов М., 1964. - С. 226-236.

92. Сибирская язва / под ред. С.Г. Колесова. М.: Колос, 1976 - 287с.

93. Сибирская язва / Н.Г. Ипатенко и др.; под ред. Н.Г. Ипатенко. -2-е изд., перераб. и доп. М.: Колос, 1996. - 335 е., ил.

94. Сибирская язва: Актуальные аспекты микробиологии, эпидемиологии, клиники, диагностики, лечения и профилактики / Г.Г.Онищенко и др.. М.: ВУНМЦ МЗ РФ, 1999. - 448 с.

95. Сибирская язва: ранние этапы внутриклеточной стадии развития инфекции / И.В.Бахтеева и др. // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 2005. - № 4.- С. 3 - 9.

96. Скоупс, Р. Методы очистки белков / пер. с англ. В.К.Антонова Р. Скоупс. М.: Мир, 1985. - С.56-90.

97. Соркин Ю.И. Сибирская язва в Восточной Сибири (1860-1967г.г.): автореф. дис. канд. мед. наук: 14.00.30/ Соркин Ю.И. Саратов, 1972, 29с.

98. Сорока, С.А. Влияние акустических колебаний на биологические объекты / С.А.Сорока // Вибрация в технике и технологиях. 2005. - № 1. — С. 39-41.

99. Сравнительный анализ средств, применяемых для дезинфекции опасных микроорганизмов / А.Д.Украинцев и др. //Химическая и биологическая безопасность. 2005.- №6 (24). -С. 12-22.

100. Степанов А.С. Разработка основ генетического анализа возбудителя сибирской язвы: дисс. . д-ра. мед. наук: 03.00.07 / Степанов А.С. Саратов, 1992. - 230с.

101. Таксономия возбудителя сибирской язвы / Л.И. Маринин и др. // Проблемы медицины, экологии и биотехнологии: сборник тезисов докладов юбилейной науч. конф. поев. 25-летию ГНЦ прикладной микробиологии, Оболенск, 1999. С. 102 - 103.

102. Теория и практика иммуноферментного анализа / A.M. Егоров и др.. — М.: Высшая Школа, 1991. 288 е.: ил.

103. Токсические свойства некоторых почв Сибири и Дальнего Востока по отношению к микробу сибирской язвы. Краевая инфекционная патология Восточной Сибири / Иванова Д.П. и др.. Иркутск, 1978. - С.213-218.

104. Трансдукционная и конъюгапионная передача плазмиды рХ02 Bacillus anthracis / Степанов А.С. и др. // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 1989. -№ 12. - С. 39-43.

105. Федорова, Г.А. Особенности эпизоотологии и биологических свойств изолятов возбудителя сибирской язвы в Алтайском крае: автореф. дис. . канд. вет. наук: 16.00.03 / Федорова Галина Анатольевна. —Барнаул, 2005. 23с.

106. Фримель, Г. Иммунологические методы / пер. с нем. А.Н. Маца; Г. Фримель. М.: Мир, 1979. - 520 е.: ил.

107. Фримель, Г. Иммунологические методы / пер. с нем. А.П. Тарасова; Г.Фримель. М.: Медицина, 1987. - 472 е.: ил.

108. Цыганкова, О.И. Гемолитическая и протеолитическая активность сибиреязвенного микроба: дис. . канд. мед. наук: 03.00.07 / Цыганкова Ольга Ивановна-Саратов, 1993. 179 с.

109. Черкасский, Б.Л. Сибирская язва / Б.Л.Черкасский, Н.Ж.Жанузаков. Алма-Ата, 1980. - 192 с.

110. Чуйская, Г.Я. Изучение сибирской язвы в связи с пребыванием В.anthracis в почве: дис. . канд. мед. наук / Чуйская Г.Я. Кишинев, 1967. -140 с.

111. Шаркова, В.Е. Ошибки при проведении иммуноферментного анализа / В.Е. Шаркова, Г.С.Власов, Н.В. Свежова // Клиническая лабораторная диагностика. — 2007. №3. - С. 42 — 45.

112. Шахбанов, А.А. Ультраструктура В. anthracis и В. cereus / А.А.Шахбанов// Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. — 1975. №6. -С. 92-96.

113. Шевченко, О.В. Протеолитическая активность возбудителя сибирской язвы: дис. . канд. мед. наук: 03.00.07 / Шевченко Оксана Владимировна. Саратов, 1999. - 99 с.

114. Шляхов, Э.Н. Иммунология, иммунодиагностика, иммунопрофилактика инфекционных болезней / Э.Н. Шляхов. Кишинев: Картя Молдовеняскэ, 1977. - 424 с.

115. Шляхов, Э.Н., Материалы испытания методов лабораторной диагностики сибирской язвы и идентификации возбудителя / Э.Н.Шляхов, Е.В.Груз // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. 1967. -№ 10.-С. 52-55.

116. Шляхов, Э.Н. Сибирская язва (очерки эпидемиологии, лабораторной диагностики и профилактики) / Э.Н.Шляхов, Е.В. Груз, В. И. Присакарь. Кишинев: Штинца, 1975. - 162 с.

117. Шуляк, Б.Ф. Грамположительные бактерии, молликуты и спирохеты. Руководство по бактериальным инфекциям собак. Том 1. / Б.Ф. Шуляк. М.: Олита, 2003. - 544 с.

118. Экспериментальные данные по выявлению вируса гриппа с помощью магнитных иммуносорбентов / В.И. Ефременко и др. // Вопросы вирусологии, 2008. №3. - С. 43 - 45.

119. Эпидемиологическая обстановка по сибирской язве в РФ Монисов А.А. и др. // Материалы Межрегион, рабочего совещания ВОЗ / ФАО по сибирской язве. Алмааты, 1997. - С. 27 - 29.

120. Ярилин, А.А. Гомеостатические процессы в иммунной системе. Контроль численности лимфоцитов / А.А.Ярилин // Иммунология. 2004. -Т.25, №5.-С.312-320.

121. A high-affinity monoclonal antibody to anthrax protective antigen passively protects rabbits before and after aerosolized Bacillus anthracis spore challenge / N. Mohamed et al.. // Infec. and Immun. 2005. - 73, № 2. - P.795-802.

122. An amplified ELISA for the detection of parvovirus В19 Ig M using monoclonal antibody to FITC / K.E. Brown et al. // J. Virol. Meth.-1989. Vol. 26. - P. 189- 198.

123. Ask, C. Comparative analysis of B. anthracis, B. cereus and related species on the basis of reverse transcpiptase sequencing of 16s RNA / C. Ask, J.A.E. Farrow, M. Darsch // Int. J. Syst. Bacteriol. 1991. - Vol. 41. - P. 343 -346.

124. Baba, T. Studies on the immunospecific and non-specific substance of Bacillus anthracis / T. Baba // Jap. J. Bacteriol. 1964. - Vol.19, №2. - P.58-60.

125. Beall, F.A. Rapid lethal effect in rats of a third component found upon fractionating the toxin of Bacillus anthracis / F.A. Beall, M.J. Taylor, C.B. Thorne //J. Bacteriol. 1962. - Vol.83, №6. - P. 1274-1280.

126. Campbell, A.M. Monoclonal antibody and immunosensor technology / A.M. Campbell // Laboratory techniques in biochemistry and molecular biology. 1991.- Vol. 23.-P. 427.

127. Characterization of the Bacillus anthracis S-layer: cloning and sequencing of the structural gene / I. Etienne-Toumelin et al. // J. Bacteriol. -1995.-Vol. 177.-P.614.

128. Demonstration of capsule plasmid in Bacillus anthracis / Green B.D. et al. // Inf. Immun, 1985. -№ 49. P. 291-297.

129. Differentiation of B. anthracis and others B. species by lectins / Cole H.B. et al. // J. Clin. Microbiol. 1984. - №1. - P.48-53.

130. Dragon, D.C. Evaluation of spore extraction and purification methods for selective recovery of viable Bacillus anthracis spores / D.C. Dragon et al. // Letters in Applied Microbiology. 2001. - Vol. 33. - P. 100-105.

131. Dragon, D.C. The ecology of anthrax spores: tough but not invincible / D.C.Dragon, R.P.Rennie // Can. Vet. J. 1995. - Vol. 36, № 5. - P. 295-301.

132. Evidence for plasmid mediated toxin production in Bacillus anthracis / P. Mikesell // Inf. Immun. 1983, № 39. - P. 371-376.

133. Evolution of Biolog system for the identification of B. anthracis Baillie L.W. et al. // Let. Appl. Microbiol. 1995. -Vol. 20, №4. - P.209 -211.

134. Fluck, R. Fluoreszenzserologishe untersuchungen von kreuzreaktion zwischen sporen von B. anthracis und sporen aerobersporenbildner / R. Fluck, R.Bohm, D.Stranch // Zentralbaltfur veterinar medizin. Series B. - 1977. - S. 497 - 507.

135. Formation and composition of the Bacillus anthracis endospore / H. Lui et al. // J. Bacteriol. 2004 -Vol. 186. - P. 164-178.

136. Freer, J.H. Virulence Mecchanism of Bacterial Pathogenecity / J.N.Freer//International Workshop on Anthrax.-Winchester, 1989.-P.43.

137. Genomebased bifoinformatic selection of chromosomal Bacillus anthracis putativ vaccine candidates coupled with proteomic identification of surface-associated antigens / Ariel N. et al. // Infection Immun, 2003. №71. - P. 4563-4579.

138. Hugh Jones. M.E. Global Report, 2000. 4th International Conferenceon Anthrax. Program and Abstracts Book. June 10- 13, 2001. St. John s College. -Annapolis. Maryland; USA, 2001. P. 13.

139. Human Ingestion of Bacillus anthracis — Contaminated Meat H. Kassenbord et al. // 4th International Conference on Anthrax. Program and Abstracts Book. June 10 13, 2001. St. Johns College. - Annapolis. Maryland; USA, 2001.- P. 19-20.

140. Identification of Bacillus anthracis by Using Monoclonal Antibody to Cell Wall Galactos-N-Acetylglucosamin Polysaccharide / W. John Ezzell et al. // Journal of Clinical Microbiology, 1990. P.223-231.

141. Identification of В. anthracis Sterne strain from strains using special medium / J.E. Parker et al. // The 2-nd International Workshop on the molecular biology of B. anthracis, B. cereus, B. thuringiensis. — Taos; New Mexico; USA, 1999.-P. 48.

142. Identification of B. anthracis using the API 50 CHB system / Conge R. et al. // Proc. Inter. Workshop on anthrax. Winchester, England, 1996. -№87.-P. 34-36.

143. Identification of Bacillus anthracis by Using Monoclonal Antibody to Cell Wall Galactos-N-Acetylglucosamin Polysaccharide / Ezzell J. W. et al. // Journal of Clinical Microbiology. 1990. - P.223-231.

144. Identification of the immunodominant protein and other proteins of the Bacillus anthracis exosporium / C.T.Steichen et al. // J. Bacteriol. 2003. -Vol. 185.-P. 1903-1910.

145. Immunological Analysis of Cell-Associated Antigens of Bacillus anthracis / J. W. Ezzell et al. // Infection and Immunity. 1988. - Vol.56, № 2. -P. 349-356.

146. Interaction of the 20 kDa and 63 kDa fragments of anthrax protective antigen: Kinetics and thermodynamics / Kenneth A. Christensen et al. // Biochemistry. 2005. - Vol. 44, № 3. - P.1047-1053.

147. Isothiocyanate compounds as fluorescent labelling agents for immune serum / J.L. Riggs et al. // Amer. J. Path. 1958. - Vol. 34. - P. 1081 - 1097.

148. John, W. Ezzell. Immunological Analysis of Cell-Associated Antigens of Bacillus anthracis / W. Ezzell John, G. Abshire Teresa // Infection and Immunity. -1988. V. 56, № 2. - P. 349-356.

149. Keppie, J. The chemical basis of the virulence of Bacillus anthracis. IX. Its Aggressins and their mode of action / J.Keppie, P.W. Harris Smith, H. Smith // Brit. J. Exptl. Path. - 1963. - Vol. 44, № 4. - P. 446 - 453.

150. Koehler, Т.М. Bacillus subtilis (natto) plasmid pLS20 mediates interspecies plasmid transfer/ T.M.Koehler, C.B. Thorne // J. Bacteriol. -1987. -Vol. 169, № 11. P. 5271 - 5278.

151. Laemmli, V.K. Cleavage of structural protection during the assemble of the bacteriophage T4 / V.K.Laemmli // Nature. 1970. - Vol. 27. - P. 680 -685.

152. Lawrence, D. Differentiation of Bacillus anthracis from Bacillus cereus by Gas-Chromatographic Whole-Cell Fatty-Acid Analysis / D.Lawrence, S. Heitefuss // Journal of Clinical Microbiology. 1997. - Vol. 29. - P.P. 1508-1512.

153. Logan, N.A. Bacillus and recently derived genera // Manual of clinical microbiology / N.A. Logan, P.C. Turnbull. Washington (D. C.): American Society for Microbiology, 1999. - P. 357-369.

154. Lorez, I. Bacterial sporulation is not under the same control as catabolit repression of enzymes / I.Lorez, B.Wong, E.Freese // Abstrs. 79 th. Ann. Meet. Amer. Soc. Microbiol. Los Angeles, Calif.-1979. - Washington D.C., 1979. -P. 111.

155. Mishell, B.B.Selected methods in cellular immunology / B.B. Mishell, S.M. Shiigi. San Francisco W.H. Freeman and Company, 1980. - 486 p.

156. Mock, M. /М. Mock, A. Fouet //Microbiol. Rev. 2001. - Vol. 55. -P. 647—671.

157. Molecular characterization of the Bacillus anthracis main S-layer component: evidence that it is the major cell-associated antigen / S. Mesnage et al. //Mol. Microbiol. 1997. - Vol. 23, №6. - P. 1147-1155.

158. Monoclonal Antibodies for Bacillus anthracis Spore Detection and Functional Analyses of Spore Gennination and Outgrowth 1 / Swiecki M.K. et al. // J. of Immunology. 2006. - Vol. 176. - P. 6076-6084.

159. Neutralizing Monoclonal Antibodies Directed against PA Bacillus anthracis / F. Brossier et al. // 4 International Conference Anthrax, June 10 13, 2001, St John's College Annapolis. - Maryland; USA, 2001. - P. 44.

160. Phillips, А.Р. Investigating of spores surface antigen in the genus Bacillus by the use polyclonal antibodies in immunofluorescent tests / A.P. Phillips, K.L. Martin // J. App. Bacteriology. 1998. - №64. - P. 47 - 55.

161. Potter, M. Growth of primary plasmocytomas in the mineral oil-conditioned peritoneal environment / M. Potter, J.G. Pumphrey, J.L. Walters //J. Natl. Cancer Inst. 1972. - Vol. 49, №. 1. - P. 305-308.

162. Protein measurement with the folin phenol reagent / O.H. Lowry et al. // J. Biol. Chem. 1951. - Vol. 193. - P. 265-275.

163. Proteomic analysis of the spore coats of Bacillus subtilis and Bacillus anthracis / Lai E.M. et al. // J. Bacteriol. 2003. - Vol. 185. - P. 1443-1454.

164. Redmond, C. Identification of proteins in the exosporium of Bacillus anthracis / C. Redmond et al. // J. Microbiol. 2004. - Vol. 150. - P. 355 - 363.

165. Ruhfel, R.E. Interspecies transduction of plasmids, among Bacillus anthracis, B. cereus, and B. thuringiensis / R.E. Ruhfel, N.J. Robillard, C.B. Thorne // J. Bacteriol. 1984.-Vol. 157, №3.-P. 708-711.

166. Selective growth medium for the rapid environmental recovery and identification of anthrax bacillus / J.L. Kiel et al. // 3r-d International Conference on Anthrax, Plymouth, England. 7 10-th September 1998. - Plymouth, 1998. -P. 54.

167. Steichen, C.T. Characterization of the exosporium basal layer protein BxpB of Bacillus anthracis / C.T. Steichen, J.F. Kearney, C.L. Turnbough // J. Bacteriol. 2005. - Vol. 187. - P. 5868-5876.

168. Suppresion of sporulation of Bacillus subtilis / Freese F. et al. // Spores Pap. 5 th Int. Spore Conf. Fontana (Wise.), 1971. Washington, 1972. - P. 212-221.

169. Sylvestere, P. A collagen-like surface glycoprotein is a structural component of the Bacillus anthracis exosporium / P. Sylvestere, E.Coutrure-Tosi, M.Mock // Mol. Microbiol. 2002. - Vol. 45. - P. 169 - 178.

170. Thorne, C.B. Transducing Bakteriophag of B. cereus and B. anthracis / C.B. Thorne // J. Bacteriol. Rew. 1968. - Vol. 32. - P. 358 - 361.

171. Thorsell, W. Comparison of the haemolytic properties of Bacillus cereus and Bacillus anthracis / W. Thorsell, B.K. Nordberg // Acta vet. scand. -1961.-Vol. 2, № l.-P. 15-21.

172. Tijssen, P. Practice and theory of enzyme immunoassays / P. Tijssen// Laboratory techniques in biochemistry and molecular biology.— Amsterdam; New York; Oxford: Elsevier, 1985. Vol. 15.

173. Tombin, P.K. Electroforetic transfer of proteins from polyacrilamide gel to nitrocellulose sheets / P.K. Tombin, T.Staehelin, J. Gordon // Proc. Natl. Acad. Sci. 1979. - V. 76, №9. - P. 4350 - 4354.

174. Vodkin, MH. Cloning of the protective antigen gene of Bacillus anthracis / MH. Vodkin, SH. Leppla // Cell. 1983. - Vol. 34. - P. 693-697.

175. Williams, D.D. Surface layer protein EA1 is not a component of Bacillus anthracis spores but is a persistent contaminant in spore preparations D.D. Williams, C.L. Turnbough // J. Bacteriol. 2004. - Vol.186 - P.566-569.

176. Yelton, D.B. Transduction in B.cereus by each of two bacteriophages / D.B. Yelton, C.B. Thorne // J.Bacteriol. 1990. - Vol. 102. -P. 573 - 579.

177. Yin, Fen-Ke. A lepfenebacillusnak a hozza hasonlo aerob sporas bakteriumoktel vato elkulonitese, az agargeldiffuzions precipitacions probaval / Yin Fen-Ke // Magy. Allatorv. Lapja. 1961. - Vol. 15, №10. - P. 369-373.